Аңдатпа
Introduction. Catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia (CPVT) is a severe inherited arrhythmia linked to RYR2 mutations. CPVT is a major cause of sudden cardiac death in the young. Here we outline the experience of induced pluripotent stem cells (iPSCs) generation from a healthy donor and a patient with CPVT. By establishing iPSCs from affected individuals, this study can reveal mechanisms of disease pathophysiology and the potential of iPSC technology to develop cardiogenetic research and personalized medicine. Aim. To investigate experimental methods used to generate and validate iPSCs derived from a healthy donor with wild-type RYR2 and a patient with RYR2 mutation. Materials and methods. A 33-year-old female patient with CPVT was genetically screened using Sanger sequencing, revealing a de novo RYR2 mutation (c.13892A>T; p.D4631V). Peripheral blood mononuclear cells of a healthy donor and a patient were isolated by density gradient centrifugation and reprogrammed into iPSCs using the Sendai virus method. Cells were cultured under feeder-free conditions in Essential 8™ Flex medium. Pluripotency was confirmed via several methods, such as immunocytochemistry and G-banding karyotyping. Results. The isolated cells showed optimal morphology, with cell colonies displaying smooth, well-defined edges and a rounded shape. The cells within the colonies were densely packed. Immunostaining confirmed the expression of the pluripotency marker TRA-1-60. Karyotype analysis revealed that all derived cell lines maintained stable chromosomal integrity. Conclusions. iPSCs were successfully generated from a healthy donor to serve as a “control” for comparison with patient-derived iPSCs carrying a de novo heterozygous RYR2 mutation (c.13892A>T; p.D4631V). This iPSC-based model offers a valuable platform for investigating CPVT pathophysiology and testing potential therapeutic approaches. Введение. Катехоламинергическая полиморфная желудочковая тахикардия (КПЖТ) - это тяжелая наследственная аритмия, связанная с мутациями RYR2. КПЖТ — одна из основных причин внезапной сердечной смерти у молодых людей. Здесь мы описываем опыт генерации индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (иПСК) от здорового донора и пациента с КПЖТ. Благодаря получению иПСК от пациентов это исследование может раскрыть механизмы патофизиологии заболевания и потенциал технологии иПСК для развития кардиогенетических исследований и персонализированной медицины. Цель. Исследовать экспериментальные методы, используемые для создания и валидации иПСК, полученных от здорового донора с диким типом RYR2 и пациента с мутацией RYR2. Материалы и методы. Пациентка 33 лет с КПЖТ прошла генетический скрининг с использованием секвенирования по Сэнгеру, выявив мутацию RYR2 de novo (c.13892A>T; p.D4631V). Мононуклеарные клетки периферической крови здорового донора и пациента были выделены центрифугированием в градиенте плотности и перепрограммированы в иПСК с использованием метода вируса Сендай. Клетки культивировались в условиях без фидера в среде Essential 8™ Flex. Плюрипотентность была подтверждена несколькими методами, такими как иммуноцитохимия и кариотипирование с G-бэндингом. Результаты. Изолированные клетки продемонстрировали оптимальную морфологию, при этом клеточные колонии имели гладкие, четко очерченные края и округлую форму. Клетки внутри колоний были плотно упакованы. Иммуноокрашивание подтвердило экспрессию маркера плюрипотентности TRA-1-60. Анализ кариотипа показал, что все полученные линии клеток сохраняли стабильную хромосомную целостность. Выводы. иПСК были успешно получены от здорового донора, чтобы служить «контролем» для сравнения с iPSC, полученными от пациента, несущими гетерозиготную мутацию RYR2 de novo (c.13892A>T; p.D4631V). Эта модель на основе иПСК предлагает ценную платформу для исследования патофизиологии КПЖТ и тестирования потенциальных терапевтических подходов. Кіріспе. Катехоламинергиялық полиморфты қарыншалық тахикардия (КПҚТ) RYR2 мутацияларымен байланысты ауыр тұқым қуалайтын аритмия болып табылады. КПҚТ жас ересектердегі кенеттен жүрек өлімінің негізгі себебі болып табылады. Мұнда біз сау донордан және КПҚТ бар науқастан индукцияланған плюрипотентті дің жасушаларын (иПДЖ) генерациялау тәжірибемізді баяндаймыз. Зардап шеккен адамдардан иПДЖ алу арқылы бұл зерттеу аурудың патомеханизмдері туралы түсінік бере алады және иПДЖ технологиясының кардиогенетикалық зерттеулер мен дербес медицинаны дамыту мүмкіндігін көрсетеді. Мақсаты. Жабайы типті RYR2 бар сау донордан және RYR2 мутациясы бар науқастан алынған иПДЖ генерациялау және тексеру үшін қолданылатын эксперименттік әдістерді зерттеу. Материалдар мен әдістер. КПҚТ-мен ауыратын 33 жастағы әйел науқаста Сэнгер секвенирлеу арқылы генетикалық скрининг нәтижесінде жаңа RYR2 мутациясы анықталды (c.13892A>T; p.D4631V). Дені сау донор мен пациенттен алынған перифериялық қан мононуклеарлы жасушалары градиенті центрифугалау арқылы бөліп алынып, Сендай вирусы әдісімен иПДЖ-ға қайта бағдарламаланды. Жасушалар Essential 8™ Flex ортасында фидерсіз жағдайда өсірілді. Плюрипотенттілігі иммуноцитохимия және G-бэнд кариотиптеу сияқты әдістермен расталды. Нәтижелері. Жасушалар оңтайлы морфологияны көрсетті, жасуша колониялары тегіс, шеттері анық және дөңгелек пішінді. Колониялардағы жасушалар тығыз орналасқан. Иммуноцитохимия әдісі TRA-1-60 плюрипотентті маркердің экспрессиясын көрсетті. Кариотиптік талдау барлық жасуша линиялары тұрақты хромосомалық тұтастықты сақтайтынын көрсетті. Қорытынды. иПДЖ-да жаңа гетерозиготалы RYR2 мутациясы (c.13892A>T; p.D4631V) бар пациенттен алынған иПДЖ-мен салыстыру үшін «бақылау» ретінде қолдану үшін сау донордан сәтті алынды. Бұл иПДЖ негізіндегі модель КПҚТпатофизиологиясын зерттеу және ықтималды емдік әдістерді сынау үшін құнды платформаны ұсынады.